病原核酸检测包括样本采集、核酸提取、核酸扩增。不同样本的处理和保存，样本采集的时间和部位，核酸提取的效率以及扩增试剂的灵敏度都会影响最终结果的判读。核酸提取和PCR扩增相信大家都比较熟悉。关于样本采集和预处理大家知道多少呢？

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病原核酸检测在临床上常见的样本类型有组织、血液、拭子、痰液等，其中有些样本比较粘稠，直接提取效果欠佳，不同样本具有不同的保存方式以及操作注意事项。

01 组织样本 

状组织样本短时间内无法充分裂解，一般需要进行样本预处理。

新鲜组织样本用生理盐水清洗2次，再将清洗后的组织块用玻璃砂研磨或组织研磨机制成匀浆，加入生理盐水或PBS进行剧烈振荡混匀、离心，取上清进行核酸提取。

注意事项：建议组织样本任何一边大小不大于5mm，加入10倍体积保存液中。如果组织样品厚度过大，保存液深入组织中的速度过慢将会造成核酸降解。

 

02 血液样本 

采用含有抗凝剂的真空采血管保存即可。但采血管中的抗凝剂种类多样，抗凝剂的种类也会直接影响后续检测结果，建议使用EDTA或枸橼酸钠抗凝管。采集完血液，颠倒混匀备用。在核酸提取过程中很难去除肝素，且肝素对PCR反应有很强的抑制作用，因此不建议使用肝素抗凝管。

样本特点：血样样本成分复杂，包含红细胞、白细胞、蛋白质、血小板等，提取时要保证裂解充分的同时去除无关杂质，杂质去除不干净，会导致蛋白和盐离子残留，可能影响下游实验。

全血不加抗凝剂分离的上清是血清，加入抗凝剂分离的上清是血浆。取全血后，静止1-2 h，置于离心机3000 rpm离心15 min即可获得血清或血浆。






 04 拭子样本 

拭子样本一般储存在病毒保存管中。病毒保存管根据保存液成分不同又分为灭活型病毒保存管和非灭活型病毒保存管。采集后的待测样本可立即用于处理，或-20℃保存3个月，应避免反复冻融。样本运送应采用干冰或冰壶加冰或泡沫箱加冰密封后进行运输。

注意事项：采样拭子直接接触采样部位，拭子的材质会对后续检测结果产生影响。采样拭子宜选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙材质的拭子，且柄部为非木质材料。由尼龙纤维经喷雾技术制成的植绒拭子，吸水和释放性更好，在病毒释放率和稳定性上均优于其他材质拭子。






 05 痰液样本 

痰液中含有大量黏蛋白和杂质，比较粘稠，直接进行核酸提取效果不佳，因此要进行痰液预处理。用NaOH或变性剂液化，然后离心取沉淀进行核酸提取。

注意事项：注意样本内切勿混入唾液及鼻咽分泌物。对无痰、少痰或痰脓不易咯出者，可用45°C加温生理盐水（0.9％NaCl）雾化吸入后留取。

总而言之，样本的收集及适当的预处理，是成功进行核酸提取的前提条件，能够增加病原核酸检测结果的可靠性。

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